МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРИКАЗ
от 27 марта 2020 г. N 160
ОБ УТВЕРЖДЕНИИ МЕТОДИКИ
ПРОИЗВОДСТВА ЭКСПЕРТИЗ (ИССЛЕДОВАНИЙ) БИОЛОГИЧЕСКОЙ
БЕЗОПАСНОСТИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОРМОВ И КОРМОВЫХ
ДОБАВОК ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
В соответствии с пунктом 13 Правил государственной регистрации генно-инженерно-модифицированных организмов, предназначенных для выпуска в окружающую среду, а также продукции, полученной с применением таких организмов или содержащей такие организмы, включая указанную продукцию, ввозимую на территорию Российской Федерации, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации
от 23 сентября 2013 г. N 839 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2013, N 39, ст. 4991), приказываю:
Утвердить прилагаемую Методику производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок для животных.
Министр
Д.Н.ПАТРУШЕВ
Утверждена
приказом Минсельхоза России
от 27.03.2020 N 160
МЕТОДИКА
ПРОИЗВОДСТВА ЭКСПЕРТИЗ (ИССЛЕДОВАНИЙ) БИОЛОГИЧЕСКОЙ
БЕЗОПАСНОСТИ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ,
ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОРМОВ И КОРМОВЫХ
ДОБАВОК ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
I. Общие положения
1. Настоящая Методика устанавливает порядок проведения экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок для животных (далее - экспертиза, ГМО соответственно).
2. Экспертиза проводится организацией (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике.
3. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО приведены в главах V, VI настоящей Методики.
4. Результаты экспертизы оформляются заключением о результатах экспертизы, составленным на основании протоколов исследований ГМО, которое должно содержать следующие сведения:
наименование заключения;
полное наименование и место нахождения организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;
наименование ГМО с указанием его таксономического статуса;
полное наименование, место нахождения, идентификационный номер налогоплательщика юридического лица, осуществляющего на территории Российской Федерации генно-инженерную деятельность в целях создания ГМО (далее - заявитель);
полное наименование и место нахождения юридического лица либо фамилия, имя, отчество (при наличии), место жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя образцов ГМО, представленных на экспертизу;
вид предполагаемого целевого использования ГМО;
сведения о трансформационном событии в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;
место депонирования и коллекционный номер (указывается для депонированных штаммов ГМО);
регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО);
регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии);
сведения о регистрации ГМО за рубежом (при наличии);
оценка полноты представленных заявителем документов и данных;
краткое содержание документов и данных, представленных заявителем для проведения экспертизы;
перечень исследований ГМО с указанием их результатов;
описание представленных заявителем на экспертизу образцов ГМО и исходного организма-реципиента с указанием их количества, а также оценку их пригодности для проведения исследований;
выводы о результатах экспертизы: о наличии или отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду;
специальные условия использования ГМО (при наличии);
срок действия свидетельства о государственной регистрации ГМО (в случае отсутствия сведений о негативном воздействии ГМО на окружающую среду);
фамилии, имена, отчества (при наличии) лиц, проводивших экспертизу, ученые степени, ученые звания (при наличии), места их работы и должности;
дата и номер заключения экспертизы;
подпись руководителя организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы.
5. К заключению о результатах экспертизы должны прилагаться протоколы исследований ГМО, на основании которых оно составлено, подписанные лицами, проводившими исследования.
6. В случае если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные пунктами 7, 11, 15 настоящей Методики, и (или) необходимые образцы, пригодные для проведения исследований в случаях, если протоколы исследований не представлены заявителем, экспертиза не проводится. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лаборатории), аккредитованной в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике, в которую обратился заявитель для проведения экспертизы.
II. Экспертиза ГМО, используемого для производства кормов
и кормовых добавок для животных, полученных с применением
жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом,
или содержащих такой организм
7. В рамках экспертизы ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, осуществляется анализ представленных заявителем документов и данных:
а) наименования ГМО с указанием его таксономического статуса; полного наименования, места нахождения, идентификационного номера налогоплательщика заявителя; полного наименования и места нахождения юридического лица либо фамилии, имени, отчества (при наличии), места жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя образцов ГМО, предоставленных на экспертизу; вида предполагаемого целевого использования ГМО; регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проводится экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО); регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии) либо информации об отсутствии такого свидетельства;
б) сведений об исходном организме-реципиенте (таксономическая характеристика с указанием метода идентификации; источник выделения штамма: субстрат, географический пункт, дата выделения; методы идентификации штамма, кем идентифицирован (фамилия, имя, отчество (при наличии)), ссылка на использованные определители);
в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристики экспрессии встроенных или измененных генов;
г) сведений о трансформационном событии в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;
д) информации о способе генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);
е) информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГМО, паспорт штамма ГМО (для депонированных штаммов ГМО) либо следующей информации (в случае непредставления информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГМО, паспорта штамма ГМО):
о культурально-морфологических, физиолого-биохимических (ферментативных), антигенных, биологических свойствах и генетических особенностях штамма ГМО;
об условиях культивирования: наименованиях питательных сред, pH среды, температуре и продолжительности выращивания, сроке хранения и периодичности пересева культуры штамма ГМО в нативной форме;
о применяемом способе и условиях хранения штамма ГМО: в случае лиофилизации указывается продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, режим высушивания, температура хранения, срок хранения; в случае криоконсервации указывается продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, скорость замораживания (град/мин), температура хранения, срок хранения;
о диссоциации культуры в зависимости от метода хранения (описание морфологических типов колоний на конкретной среде с подробным описанием типа, сохраняющего полезный или диагностический признак);
о среде, на которой заявителем предоставляется штамм ГМО;
о количестве, дате приготовления и сроке годности образцов штамма ГМО;
ж) информации о вносимых генах (для организмов-доноров указывается таксономический статус, данные о вирулентных, аллергенных и патогенных свойствах);
з) описания свойств, приобретенных ГМО в результате модификации;
и) характеристики различий ГМО с исходным организмом-реципиентом, в том числе описания способа размножения, распространения, вирулентности, схемы культивирования, новых фенотипических свойств, биологических преимуществах ГМО по сравнению с исходным организмом;
к) описания методик, позволяющих подтвердить таксономический статус ГМО и характеристику генетической модификации, описания нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов, состава и свойств стандартных образцов;
л) результатов изучения стабильности ГМО, в том числе в организмах животных (крыс или мышей), а также оценки способности к переносу генов, введенных в исходный организм-реципиент с использованием методов генной инженерии, в том числе генов устойчивости к антибиотикам, в другие организмы;
м) информации о потенциальной колонизации ГМО в желудочно-кишечном тракте животных и его влиянии на естественную микрофлору;
н) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, в государствах - членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм;
о) копий заключения о результатах молекулярно-генетического исследования ГМО;
п) информации о биоинформатическом анализе, поиске гомологии рекомбинантного белка с аминокислотными последовательностями токсических белков, белков, обладающих фармакологической или иной биологической активностью, при использовании специализированных баз данных;
р) информации об условиях промышленного культивирования ГМО;
с) протоколов исследований, указанных в пункте 8 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике (при наличии).
8. В отношении ГМО, предназначенного для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, должны быть проведены следующие исследования в сравнении с исходным организмом-реципиентом:
а) токсикологические исследования на лабораторных животных;
б) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных;
в) исследование вирулентности ГМО на лабораторных животных;
г) исследования микробиологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных (в отношении ГМО-бактерий);
д) исследования стабильности свойств ГМО-бактерий, простейших, грибов;
е) исследование жизнестойкости ГМО на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке;
ж) исследование инвазивности ГМО с помощью кератоконъюнктивальной пробы;
з) исследование антагонистической активности ГМО с представителями резидентной микрофлоры кишечника;
и) иммунологические исследования ГМО на лабораторных животных.
9. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте "с" пункта 7 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы ГМО и исходного организма-реципиента. Соответствующие исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.
10. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 19 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО.
III. Экспертиза ГМО, используемого для производства кормов
и кормовых добавок для животных, полученных с применением
нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом,
или содержащих такой организм
11. В рамках экспертизы ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, осуществляется анализ представленных заявителем документов и данных, предусмотренных подпунктами "а" - "л", "о", "п", "р" пункта 7 настоящей Методики, а также:
а) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, в государствах - членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов негативных последствий применения кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм;
б) протоколов исследований, указанных в пункте 12 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике (при наличии).
12. В отношении ГМО, предназначенных для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, должны быть проведены следующие исследования образцов кормов и (или) кормовых добавок для животных, полученных с применением нежизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм, образцов жизнеспособного ГМО в сравнении с исходным организмом-реципиентом:
а) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных;
б) исследования на отсутствие жизнеспособного ГМО с использованием микробиологических методов в представленных образцах кормов и кормовых добавок для животных;
в) токсикологические исследования на лабораторных животных;
г) иммунологические исследования на лабораторных животных.
13. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте "б" пункта 11 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы кормов и (или) кормовых добавок для животных, образцы жизнеспособного ГМО и образцы исходного организма-реципиента. Исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.
14. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 20 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО.
IV. Экспертиза ГМО, используемых для производства кормов
и кормовых добавок для животных, полученных с применением
ГМО растительного или животного происхождения
или содержащих такой организм
15. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм, должна включать анализ представленных заявителем документов и данных, указанных в подпунктах "а" - "д", "ж", "з", "и", "к", "о" - "р" пункта 7 настоящей Методики, а также:
а) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм, в государствах - членах Евразийского экономического союза, иных государствах или об отсутствии такой регистрации, а также о наличии либо отсутствии фактов негативных последствий применения кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм;
б) результатов изучения стабильности рекомбинантного белка при обработке, хранении, технологической переработке; влияния температуры и pH, возможных модификаций и (или) образований стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивости белка к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте;
в) результатов исследований острой пероральной токсичности белка в эксперименте на лабораторных животных (мышах или крысах);
г) протоколы исследований, указанных в пункте 16 настоящей Методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации, соответствующей исследованиям, указанным в настоящей Методике (при наличии).
16. В отношении ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением ГМО растительного или животного происхождения или содержащих такой организм, должны быть проведены следующие исследования образцов ГМО в сравнении с исходным организмом-реципиентом:
а) оценка композиционной эквивалентности ГМО и исходного организма-реципиента;
б) токсикологические исследования ГМО на лабораторных животных с изучением репродуктивной токсичности;
в) иммунологические исследования ГМО на лабораторных животных;
г) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных.
17. В случае отсутствия у заявителя протоколов исследований, указанных в подпункте "г" пункта 15 настоящей Методики, им должны быть представлены образцы ГМО и образцы исходного организма-реципиента. Соответствующие исследования этих образцов проводятся организацией (испытательной лабораторией), осуществляющей проведение экспертизы.
18. Если ГМО соответствует показателям (условиям) безопасности, указанным в пункте 21 настоящей Методики, заявителю должно быть выдано заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду. В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО.
V. Требования к проведению исследований и показатели
(условия) безопасности ГМО, являющегося микроорганизмом
19. Требования к проведению исследований и показатели (условия) безопасности ГМО для производства кормов и кормовых добавок для животных, полученных с применением жизнеспособного ГМО, являющегося микроорганизмом, или содержащих такой организм:
а) токсикологические исследования на лабораторных животных должны проводиться на самцах и самках крыс или мышей (в зависимости от вида животных, сведения о которых представлены заявителем в соответствии с пунктом 7 настоящей Методики) в течение 90 календарных дней при соотношении полов 1:1. Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа "контроль" и группа "опыт". Группа "контроль" должна получать рацион с включением исходного организма-реципиента; группа "опыт" должна получать рацион с включением исследуемого ГМО. Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион, за исключением включенного исследуемого ГМО или исходного организма-реципиента. Исследуемый ГМО и исходный организм-реципиент должен быть включен в состав корма в равном количестве. Животные должны иметь доступ к корму и воде, содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.
Должны исследоваться следующие показатели состояния животных:
персистенция и выделение ГМО из организма животных;
общее состояние животных: внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова - каждые 2 календарных дня; поедаемость корма - ежедневно; масса тела - каждые 7 календарных дней;
гематологические показатели крови: концентрация гемоглобина; гематокрит; общее количество эритроцитов; средний объем эритроцита (СОЭ); среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ); средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ); общее количество тромбоцитов; общее количество лейкоцитов; дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы);
биохимические показатели крови: аланинаминотрансфераза (АЛТ); аспартатаминотрансфераза (АСТ); желчные кислоты; фосфатаза щелочная; билирубин общий; билирубин прямой; белок общий; альбумин; глобулин; креатинин; глюкоза; альфа-амилаза; липаза; лактатдегидрогеназа; общие липиды; триглицериды; холестерин; холинэстераза; мочевина; хлориды; натрий; фосфор; калий;
общий анализ мочи: цвет и прозрачность; относительная плотность; pH; белок; глюкоза; креатинин.
Исследование гематологических и биохимических показателей крови, персистенции и показателей мочи должны проводиться на 90-й календарный день опыта у 50% животных из каждой группы. По окончании восстановительного периода (10-й календарный день со дня окончания дачи рациона с ГМО, 101-й календарный день опыта) должны проводиться те же исследования у второй половины животных каждой группы.
Скармливание животным рациона, содержащего ГМО, не должно вызывать клинических изменений (показатели крови, мочи, общего состояния животных группы "опыт", персистенции и выделения ГМО не должны отклоняться от показателей группы "контроль"), не должны выявляться патологоанатомические изменения при вскрытии;
б) аллергологические исследования ГМО на лабораторных животных должны проводиться на крысах линии Вистар. Животные должны быть разделены на 2 равные группы: группа "контроль" и группа "опыт". Группа "контроль" должна получать рацион с включением исходного организма-реципиента; группа "опыт" должна получать рацион с включением исследуемого ГМО. Обе группы животных должны получать одинаковый по объему и составу рацион, за исключением включенного исследуемого ГМО или исходного организма-реципиента. Исследуемый ГМО и исходный организм-реципиент должен быть включен в состав корма в равном количестве. Рацион не должен содержать яичный белок. Животные должны иметь доступ к корму и воде; содержаться в помещении с системой отопления и регулируемым микроклиматом.
На 1-й, 3-й, 5-й календарный день опыта крысам внутрибрюшинно должен вводиться пищевой антиген - овальбумин куриного яйца (далее - ОВА), а на 21-й календарный день эксперимента должна вводиться доза ОВА, уменьшенная в 10 раз в сравнении с дозами, введенными ранее. Кормление рационами необходимо продолжать до 29-го календарного дня эксперимента, и затем необходимо ввести внутривенно ОВА, после чего должна быть оценена на протяжении 24 часов тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по величине анафилактического индекса. Непосредственно перед внутривенным введением разрешающей дозы у крыс должна отбираться кровь в количестве 0,1 - 0,2 мл из хвостовой вены для иммуноферментного определения уровня специфических антител к ОВА.
Тяжесть реакции анафилактического шока в каждой из групп животных должна оцениваться по анафилактическому индексу, учитывающему тяжесть реакции анафилаксии, и проценту летальных реакций анафилаксии.
Вычисление анафилактического индекса должно проводиться по формуле:
